频谱仪照射促进溃疡愈合机理的研究

北京医科大学第三医院消化科 董秀云 邓文林 刘秀敏

周林频谱总公司 陈晞

生物频谱仪（ＢＦＳ）有多种功能，我们曾研究发现有促进大鼠实验性胃溃疡愈合的作用。影响胃溃疡愈合的因素很多，其中胃粘膜血流量（ＧＭＢＦ）是重要的因素之一，过多的氧自由基可以损伤胃粘膜，胃粘膜分泌的糖蛋白，胃酸和胃白酶都影响溃疡的愈合。本文从以上几个方面加以研究。现报告如下。

材料和方法

雄性Wistar大鼠，体重１７０－２６０克，实验前禁食过夜。

一、 溃疡模型的制备及分组：依照我们改良的方法制备醋酸溃疡模型（１），用５０％乙酸0.1ml，注入溃疡夹的园环内，使乙酸与胃前擘的浆膜面接触１分钟，用生理盐水洗去残留的乙酸，将大网膜固定在乙酸烧灼处。动物恢复正常饮食，第二天随机分组，并开始予以不同的治疗。Ａ组为对照组，每天灌入和实验组等量的生理盐水，用布袋悬吊，时间和次数同实验组。Ｂ组为ＢＦＳ照射组，动物装在布袋内悬吊（２），每日照射２次，每次３０分钟，表皮处温度在４０℃左右。Ｃ组为红外线照射组，每天照射的时间、次数和表皮温度同ＢＦＳ组。Ｄ组为兰索拉唑组，每日2mg/kg，一天一次，经口灌入。Ｅ组为Ｄ组的处理加上Ｂ组的处理。即口服兰索拉唑又接受频谱照射。

二、胃粘膜血流量的测定：各组动物治疗１０日，第１１日用激光多普勒血流仪（Laser Doppler Flow meter BPM 403Ａ型 美国ＴＳＩ公司生产）测定ＧＭＢＦ。动物在乙醚麻醉下，仰卧位，取出胃，置于３７℃温盐水纱布上，在皮胃处剪一切口，约为0.3cm，将微型激光探头放入胃溃疡边缘，测定ＧＭＢＦ。以每１００g体重，每分钟多少毫升数表示。

三、胃液的收集及胃酸、胃蛋白酶、氨基己糖的测定：ＧＭＢＦ测定完之后，结扎幽门，３小时后，抽取胃液，测量胃液量，用0.1N NaOH滴定法，计算胃液酸度和总酸排出量，用苯酚兰的方法测定胃液内的蛋白酶的浓度（３），并计算排出量，用Neuhaus的方法测定胃液内氨基己的含量，氨基己糖是糖蛋白分子上的一个侧链。

四、胃粘膜丙二醛（ＭＤＡ）含量的测定：参照石体仁等的荧光法测定胃粘膜丙二醛的含量（４），抽取胃液之后，摘下胃，沿大弯剪开，展平，用卡尺测量胃溃疡的长、宽径，然后在溃疡边缘剪下胃粘膜重约１０－２０mg，迅速放在生理盐水内，制成约１０％的匀浆，取100μl匀浆液，加入２０％的三氯乙酸１ml，再加入硫代巴比妥酸试剂（0.67％的硫代巴比妥酸水溶液与冰醋酸等量混合）1ml、置９５℃水浴中反应３０分钟，用5ml正丁醇提取，３０００r/min离心后，测定正丁醇相的荧光强度λeX:510nm, λem:550nm.以四乙氧基丙烷（ＴＥＰ）（浓度为４×１０－８mol/L）的不同剂量（0.04,0.08,0.16,0.32μmol）为横坐标，相对荧光强度为纵坐标，画出标准曲线。在标准曲线上查出每个样本的ＭＤＡ的含量。

五、胃溃疡的病理学检查：用１０％的福尔马林固定大鼠乙酸溃疡胃的标本，１０分钟之后，以溃疡平行处于胃长轴（小弯）方向取材，用Bouin固定液再处理，以溃疡凹陷的最长径为中心切片，行ＨＥ染色。在照相显微镜下，用显微镜测微尺测量，测量的方法参照Ｍ.ＩＴＯ（５）的方法加以改进。各测量值如图所示。 （此处有图，Ｐ４６）

结果

一、 ＢＦＳ照射促进大鼠乙酸溃疡的愈合；ＢＦＳ照射组、红外线照射组，溃疡面积明显小于对照组，兰索拉唑组及兰索拉唑和ＢＦＳ联合照射组，溃疡面积比对照组更显著地减小（表１），联合组溃疡面积小于单独的ＢＦＳ组和兰索拉唑组（表１）。

表１ ＢＦＳ对大鼠醋酸溃疡愈合的影响

注Ｎ：为动物数，溃疡面积为mean±SE，下同。

二、ＢＦＳ对胃酸、胃蛋白酶和氨基己糖分泌的影响：ＢＦＳ组、红外线照射及联合组，胃液量、酸度总酸排出量、胃蛋白酶的浓度和排出量未见有明显的差异（表２），而这三组氨基己糖的分泌明显增加（表３）。兰索拉唑组，胃酸和胃蛋白酶的分泌受到抑制，氨基己糖有轻度增加（表２、３）。

表２ ＢＦＳ对溃疡大鼠胃酸、胃蛋白酶分泌的影响

*和对照组比较Ｐ＜0.05。

表３ ＢＦＳ对溃疡大鼠胃液内氨基己糖的影响

三、ＢＦＳ对ＧＭＢＦ的影响：ＢＦＳ及红外线组ＧＭＢＦ明显增加（表４），兰索拉唑组ＧＭＢＦ有减少的趋势，兰索拉唑和ＢＦＳ联合组，ＧＭＢＦ有增加的倾向（表４）。

表４ ＢＦＳ对溃疡大鼠胃粘膜血流量的影响

四、ＢＦＳ对胃粘膜丙二醛含量的影响：ＢＦＳ及红外线组，丙二醛的含量明显较对照组少，（表５），兰索拉唑和ＢＦＳ联合组，丙二醛也显著少于对照组，但兰索拉唑组，丙二醛的量却没有明显地减少。

表５ ＢＦＳ对溃疡大鼠胃粘膜丙二醛含量的影响

五、ＢＦＳ对胃溃疡愈合质量的影响：ＢＦＳ照射提高溃疡愈合的质量。粘膜层缺损最大宽度、粘膜肌层破裂宽度以及溃疡基部的厚度明显减少，而再生粘膜厚度增加。上述指数，在红外线组也有改变，但不及ＢＦＳ组显著。ＢＦＳ和兰索拉唑联合组，上述指数的改变更显著，然而兰索拉唑组，粘膜肌层破裂宽度大于对照组，也大于联合组（表６）。

注：和对照组比较＊Ｐ＜0.05

讨论

溃疡病的愈合和许多因素有关，特别是和胃酸的分泌关系更为密切，所以治疗胃溃疡首先要抑制胃酸的分泌。胃粘膜存在的幽门螺杆菌，在溃疡愈合中也起着重要的作用，但大鼠胃粘膜内，幽门螺杆菌一般不能生长。胃粘膜血流对溃疡愈合的作用不能忽视ＧＭＢＦ增加促进溃疡愈合。粘膜分泌的糖蛋白是胃粘膜的保护因素，增加时有利溃疡的愈合。过多的胃酸、胃蛋白酶、氧自由基不利于溃疡的愈合，可以损伤胃粘膜组织，用测定组织内丙二醛的含量了解氧自由基的存在情况，氧自由基可被体内超氧岐化酶、触酶等清除。当炎症、中毒、肿瘤等疾病过程中，均有自由基或基中间代谢产物参与。我们实验证明ＢＦＳ照射使ＧＭＢＦ氨基已糖的含量增加，而氧自由基减少，这可能是ＢＦＳ仪促进溃疡愈合的原因。虽然红外线组也使诸因素有改变，但不如ＢＦＳ的作用。

溃疡病复发的问题也是目前研究的重点，溃疡复发和愈合质量有密切关系，评价愈合质量的方法有多种，一般以粘膜层缺损宽度，粘膜肌层破裂宽度、再生粘膜的面积或厚度、溃疡基部的厚度为指标，愈合质量好，则粘膜宽度、粘膜肌层破裂宽度和溃疡基部的厚度减小，再生粘膜面积或厚度增大或增宽。ＢＦＳ照射组、红外线组、ＢＦＳ和兰索拉唑联合组，愈合质量好于对照组，兰索拉唑组粘膜肌层愈合的差，这可能是奥美拉唑、兰索拉唑抑制胃酸治疗胃溃疡，在停药后易复发的原因。但兰索拉唑和ＢＦＳ联合组，粘膜肌层破裂宽度小于对照组，也小于其它各组，故我们认为，临床用抑酸药如兰索拉唑，可以同时用ＢＦＳ仪照射上腹部，可以提高愈合的质量，减少溃疡病的复发。

结论

１． ＢＦＳ仪和红外线照射醋酸溃疡大鼠腹部伤口，相当于中脘穴位，促进胃溃疡的愈合，提高溃疡愈合质量，这种作用可能和增加ＧＭＢＦ、增加粘膜分泌糖蛋白，减少溃疡部的氧自由基有关。ＢＦＳ仪的作用强于红外线照射。

２． 阳离子泵的抑制剂兰索拉唑有很强的抑酸作用，促进溃疡愈合，但愈合的质量不如ＢＦＳ仪照射和兰索拉唑联合治疗。 本文只是对ＢＦＳ仪促进溃疡愈合机理初步探讨，可能还有其他机制如止痛作用，有待今后研究。