频谱治疗恶性肿瘤的定量分析

北京口腔医院 张中仪 娄铁尘 朱宣智

北京矿冶研究总院 应 平

为了进一步探讨频谱治疗恶性肿瘤及其对癌细胞的作用机理，我们从定量方面进行研究。

方法

一、 ＷＳ－频谱多功能治疗仪，由云南生物医学工程研究所研制。

二、 实验动物：昆明杂交小白鼠４０只，雌雄各半，体重２０克左右。由中国医学科学院动物中心提供。

三、 接种肿瘤：腹水型肝癌细胞（Ｈ２２）悬液２毫升。加盐水１０毫升，制成匀浆，用0.2毫升小鼠腹腔内接种。由北京肿瘤研究所提供。

４８小时形成腹水，随机分成３组。

① 对照组：１０只，不进行治疗，饲养观察。

② 频谱Ａ组：１５只，弱档照射２０分钟，距离２０厘米。

③ 频谱Ｂ组：１５只，弱档照射２０分钟，距离４０厘米。

３天、７天、１０天随机处死各组小鼠。对照组，４只、３只、４只，余组每次５只。抽取腹水计数，并把照射１０天后的腹水涂片。

四、 涂片应用Feulgen染色，供ＤＮＡ倍体测定用。

方法：石蜡切片、脱蜡、梯度酒精入水，室温当量ＨＣＬ中浸洗，入已预热６０℃当量ＨＣＬ内恒温８分钟，室温当量ＨＣＬ浸洗，蒸馏水浇入Schff试剂内，室温放置１小时，亚硫酸洗３次，每次２分钟，入水５分钟，最后脱水、透明、封片。细胞核染成紫红色，胞浆未着色。

五、 图象分析：采用西德ＳＥＭ－ＩＰＳ图象分析系统，光源卤素灯１００Ｗ，绿色滤光片，物镜４０Ｘ，将Feulgen染色节片置载物台找肿瘤细胞随机选择视野，电视摄象机将图象摄入，并在荧光屏上显示，经图象编辑测试人员分次成群测量不重叠肿瘤细胞，测试总数１００个左右，测试核ＤＮＡ倍体值（对照标准为同切片小淋巴细胞３０个左右）。

结果

讨论

频谱治疗恶性肿瘤的动物试验证明在距离２０cm、弱档、照射２０分钟，每日１次，１０天一疗程疗效显著，癌细胞杀伤率最高，肿瘤细胞周围淋巴细胞数最多，其作用原理是杀伤癌细胞及提高免疫功能。为了进一步从分子水平研究，则应用图象分析系统进行ＤＮＡ倍体测定，在照射１０天结束后测定各组细胞ＤＮＡ倍体数，其中频谱Ａ组，２Ｃ细胞消失，４Ｃ细胞占总数的0.943%。

ＤＮＡ是遗传物质基础，细胞分裂增殖的实质是ＤＮＡ的复制，肿瘤细胞是由于调节与生长控制系统障碍而获得无限增殖能力，就需合成大量的核酸，以满足其迅速生长的物质需要，因此ＤＮＡ含量的变化可作为直接反映肿瘤增殖能力的重要的生物学指标。ＤＮＡ复制是细胞进入分裂期必备的条件，因此干扰细胞ＤＮＡ复制才能抑制细胞的分裂与增殖，在本实验中对照组２Ｃ细胞6.98%，４Ｃ细胞11.215%，说明未经照射比照射的ＤＮＡ合成细胞比例增多。根据文献报道，恶性细胞核有以下几个特点：①ＤＮＡ含量显著增加，②直方图为非整倍体分布模型，③ＤＮＡ合成细胞比例增加。所以经频谱照射的具有抑制肿瘤细胞分裂繁殖的能力，因而使其自然消亡，已经形成的肿瘤细胞已有了显著结构变化，若要一步步沿原来演发的途径再倒退回正常是很设想的。事实上绝大部分所谓逆转，是经不起严格检验的，对于这类细胞只能杀死。

一种理想的治疗肿瘤的方法，就应从两方面着手，一方面杀伤癌细胞，另一方面抑制癌细胞的分裂与繁殖。我们在动物实验中已证实频谱对肿瘤有提高免疫功能，直接杀伤癌细胞的作用，从ＤＮＡ定量研究又得出了能抑制癌细胞分裂繁殖的结论，从而开创了频谱无损伤性治癌的新途径，具有实用意义。